高浓度层粘连蛋白/巢蛋白混合物

BD 产品货号：354259

储存和运输：-20度储存，干冰运输。

操作指南：

层粘连蛋白/巢蛋白混合物是EHS小鼠肿瘤基质膜的主要成分。纯化后，成等摩尔浓度分布。二价阳离子有利于混合物的形成。在2mg/mL浓度时，层粘连蛋白/巢蛋白可以形成三维胶，可用于细胞生长和分化的研究。三维胶更接近体内微环境。细胞的分化受到与单一或混合细胞外基质蛋白之间的相互作用的影响，因此在层粘连蛋白/巢蛋白混合物上培养细胞，可以用以观察并揭示细胞分化和功能性的特性机理。混合蛋白的成胶过程对温度敏感。此外，高浓度的层粘连蛋白/巢蛋白（2-6mg/mL）也用于人下颌腺泡细胞和内皮细胞的血管形成研究。

注意事项：

所有操作的工作温度不能高于4℃，蛋白需冰上操作保存，用冰块冷却的溶液或细胞悬浮液稀释。由于混合蛋白溶液粘性较高，必须使用预冷的注射器型移液管，如Gilson M系列；避免使用气压式移液管或吸头。

推荐包被方法：

铺胶步骤：细胞在胶表面培养

冰上溶解混合蛋白，所有操作均在冰浴上进行。稀释到需要的浓度：稳定成胶浓度至少为3.5mg/mL。用预冷的等压盐溶液或0.1mM钙离子培养基稀释。将稀释的蛋白溶液加入到培养器皿，1-2小时，37℃成胶。

铺胶步骤：细胞在胶内部培养

冰上溶解混合蛋白，所有操作均在冰浴上进行。根据加样体积计算并稀释混合蛋白，成胶浓度至少为3.5mg/mL，稀释过程需在预冷的培养器皿或小管中进行。加入预冷的细胞悬液，用等压盐溶液或培养基调节溶液浓度到第二步所需的浓度。系列移液管混匀混合蛋白和细胞悬液。将混合后的细胞蛋白悬液加入到预冷的培养板中，37℃孵育1-2小时成胶。